用于體視顯微鏡觀(guān)察的標本介紹
發(fā)布人：發(fā)布時(shí)間：2014/9/4
用于體視顯微鏡觀(guān)察的標本必經(jīng)經(jīng)過(guò)一定的準備過(guò)程才能在體視顯微鏡下形成清晰的像。在入肘照明和透射照明中，對于標本的光學(xué)要求有很大區別，在入射照明中像是由標本的反射光所形成的，相反，在透射照明中像是由透射光所形成的，在這種情況下反射光對于像的形成不僅無(wú)益，而且會(huì )降低像的清晰度。
用入射光雙察的標本，它的準備工作十分簡(jiǎn)單，只是清潔標本的表面并切割為適當大小的小塊。而用透射光觀(guān)察的標本，必須具有由于光吸收的差異而產(chǎn)生的一定反差，才能在體視顯微鏡下被觀(guān)察到。為此，標本必須經(jīng)過(guò)一系列復雜的處理和制備過(guò)程，這種制備技術(shù)就是我們一般所說(shuō)的生物顯微技術(shù)。
從光學(xué)觀(guān)點(diǎn)出發(fā)，對于用透肘光觀(guān)察的體視顯微鏡標本有如下要求:
(1)適當的厚度。這種厚度在較好的光學(xué)系統中能夠達到盡可能高的分辨力，并且與這個(gè)系統的場(chǎng)深相適應。
(2)足夠的透明度。
(3)能夠形成建立在吸收差異上的足夠的反差。
實(shí)際上所有的生物學(xué)材料通過(guò)石蠟包埋、切片(成涂片)、貼附、溶蠟、透明等過(guò)程，能夠得到在厚度和進(jìn)明度上符各要求的標本，然后通過(guò)染色程序得到一定程度的反差。
通常在透射式光學(xué)體視顯微鏡中所使用的生物學(xué)和醫學(xué)組織切片，它的厚度一般為3-7μm。在這個(gè)厚度范圍內，當使用低倍物鏡(例如10x)觀(guān)察時(shí)，場(chǎng)深對于瓏察整個(gè)切片厚度是完全足夠的，當使用高倍物鏡(例如100 x)觀(guān)察時(shí)，場(chǎng)深僅僅是這個(gè)切片厚度的很小部分，不斷地從上到下移動(dòng)細調可以得到切片的總體印象。因此，5-75μm厚的常規切片可以被認為是在低放大倍數和高放大倍數理想情況之間的調和，兩者都較好地考慮到了場(chǎng)深和分辨力。同時(shí)由于種種原因，這種調和的厚度也滿(mǎn)足了實(shí)際工作中的許多要求，首先物體的細微結構不總是第一重要的，其次在很薄(1-25μm)的切片中生物標本中的立體關(guān)系就看不到了，與此相反，當使用8-10μm或者更厚的切片時(shí)，除了分辨力上可覺(jué)察的權失而外，還會(huì )引起生物標本中不同層次的互相重處。
經(jīng)過(guò)固定、包埋、切片、熔蠟、透明等處理之后的動(dòng)植物材料標本是足夠薄和透明的了，但是反差很小，并且這種反差主要來(lái)自于折射和衍射。顯然，這種標本在反差上是遠不理想的。但是這可以通過(guò)降低折射效果給它扭蓋上“吸收物質(zhì)”，并通過(guò)吸收的差異而增大反差。在標本與周田區城之間的折肘，可以通過(guò)把標本封藏在加拿大樹(shù)膠或其他人工合成的封截介質(zhì)中的方法而減小。所有這些封成介質(zhì)經(jīng)過(guò)揮發(fā)或聚合使其變硬之后，它們的折射率就接近被固定或被脫水的動(dòng)植物組織主要成分的折射率。在大多數動(dòng)植物組織中這個(gè)數值為1.51-1.5.4同時(shí)用這個(gè)方法還可以消除蓋玻片下面的反射引起的閃光。
已經(jīng)應用了一個(gè)多世紀，并且能夠給體視顯微鏡標本帶來(lái)較好反差的最有效方法是染色。一般沒(méi)有染色的生物標本，特別是當放里在具有與生物標本相近折射率的介質(zhì)中時(shí)，像的反差是很小的。在染色的標本中，像的反整的增大是建立在染料選擇性分布的基礎上。染色與未染色標本在反差上有巨大差異。
生物切片經(jīng)?？葙N在具有26x76mm標準尺寸和1.1-1.3mm厚度的毅玻片上，載玻片的兩面應是平行平面。對于毅玻件厚度的要求不是很?chē)栏竦?，但是當它的厚度超過(guò)一些較高矯正程度集光器的自由工作距離時(shí)，載玻片厚度對于聚焦光裸以及在物體平面上形成視場(chǎng)光門(mén)的像就變得宜要了。對于這種情況，厚度為0.9-1.O mm的載玻片是比較合透的。至于蓋玻片在第三章中已講過(guò)了，這里不再重復。
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