相差、暗視野和熒光偏光顯微鏡的示范觀(guān)察
發(fā)布人：shpuda發(fā)布時(shí)間：2014/4/23
一、實(shí)驗器材
1.菌種
大腸桿菌和釀酒酵母的培養斜面。
2.溶液和試劑
無(wú)菌水，香柏油，二甲苯，吖啶橙和蒸餾水等。
3.儀器和其他用品
相差偏光顯微鏡，暗視野聚光器，熒光顯微鏡，合軸調節望遠鏡，濾光片，載玻片和蓋玻片等。
二、目的要求
1.了解相差、暗視野及熒光顯微鏡的工作原理。
2.學(xué)習并掌握使用上述3種偏光顯微鏡觀(guān)察微生物祥品的基本方法。
三、基本原理
使用普通明視野顯微鏡進(jìn)行微生物樣品的觀(guān)察時(shí)通常需要對樣品進(jìn)行染色處理，以提高反差。這是因為明視野偏光顯微鏡的照明光線(xiàn)直接進(jìn)人視野，屬透射照明，透明的活菌在明視野中會(huì )由于和明亮的背景間反差過(guò)小而不易看清細節。本實(shí)驗介紹的相差、暗視野及熒光顯微鏡，都是通過(guò)在成像原理上的改進(jìn)，提高了顯徽觀(guān)察時(shí)樣品的反差，可以實(shí)現對微生物活細胞的在接觀(guān)察。
(一)相差顯微鏡
在明視野下看起來(lái)透明的樣品如活細菌細胞，其不同部分的密度和折射率實(shí)際上是有差異的。光線(xiàn)通過(guò)這些樣品時(shí)，光波的相位因此發(fā)生變化.但這種相位變化不表現為明暗和顏色上的差異，不能為人眼所悠知。相差偏光顯微鏡到能通過(guò)其特殊裝置—環(huán)狀光闌和相板，將光的相位差轉變?yōu)槿搜劭梢圆煊X(jué)的振幅差(明暗差)。如果產(chǎn)生的干涉為相長(cháng)干涉，則振幅的同相膠相加而變大(圖Ⅲ-9A)，該部分樣品的亮度加大;如果所產(chǎn)生的干涉為相消干涉(圖Ⅲ-9B),則振福的異相量相消而變小，這部分就變得較暗。這樣.變相位差為振幅差的結果，使原來(lái)透明的樣品會(huì )由于其內部不同組分間光干涉現象的差異表現為明顯的明暗差異，對比度增加，能更加清晰地觀(guān)察到在普通光學(xué)偏光顯微鏡中看不到或看不清的活細胞及細胞內的某些細微結構。
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